1.放射免疫分析(RIA)基本原理:其原理为标记抗原(Ag*)和非标记抗原(Ag)对有限量特异性抗体竞争性结合反应。
Ag*是试剂成分,而Ag是待测抗原,Ab也是试剂中成分。 Ag*和Ab的量是固定微量的,而待测的Ag量是不固定的。
解释:如果将Ag*-Ab复合物与游离(剩余的)Ag*分开,分别测定它们的放射性,就可算出结合态的标记抗原(B:Ag*-Ab复合物中的Ag*)与游离态的标记抗原(F:单独、剩余的Ag*)的比值(B/F),或算出结合率[B/(B+F)],它们与待测Ag量呈函数关系(反比关系)。
2.剂量反应曲线:剂量反应曲线又称标准曲线,即用标准物浓度(Ag)对结合率[B/(B+F)]作图。在RIA中被测定物质的浓度(量)可从标准曲线上查得;同时标准曲线又是验证方法的灵敏度、检验抗血清质量和鉴定标准品纯度的主要依据。随着计算机的普及,可通过计算机的放免处理程序来绘制标准曲线。
3.测定方法:RIA测定方法分三个步骤即:①待测标本中未标记抗原,标记抗原和抗体进行竞争抑制反应;②将标记抗原和抗体相结合的复合物(B)和未结合的标记抗原(F)的分离(分离方法有第二抗体法、聚乙二醇沉淀法、PR法、活性炭吸附法等);③对B进行放射性强度的测定(B为标记抗原抗体复合物,F为游离标记抗原)。根据标准曲线医学教育网整理查得待测抗原浓度。