【摘要】 目的 分析HBeAg和抗-HBe双阳性的原因。方法 初筛试验用一步法检测。复核试验HBeAg仍用一步法和微粒子酶免分析法,抗-HBe用二步法和微粒子酶免分析法。结果 63份HBeAg和抗-HBe双阳性标本经复核:18份HBeAg阴性,45份抗-HBe阴性。结论 “e”系统双阳多为操作误差和一步法造成,必需进行复核。
关键词 乙型肝炎病毒 酶免检测 复核
乙型肝炎病毒HBeAg阳性,表明病毒复制活跃、传染性强,与HBsAg同时阳性发生肝癌的危险系数增加60倍,抗-HBe阳性说明病毒复制减少,传染性弱。近年来,普遍使用ELISA一步法,在工作中遇到HBeAg和抗-HBe双阳性的少见模式,为了分析这一现象,笔者进行了研究,现报告如下。
1 材料与方法
1.1 标本来源 本院门诊和住院患者1910例,其中63例初筛模式为HBsAg、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc4项阳性。
1.2 试剂和仪器 (1)ELISA试剂盒、HBeAg和抗-HBe为上海科华生物技术有限公司产品,批号分别为:20040316、20040516,酶标仪MK-2型、洗板机均为芬兰雷索公司产品。HBeAg样品吸光度值/临界值(S/N)≥2.1判阳性,抗-HBe以抑制率>50%判阳性。(2)微粒子酶免分析(MEIA),使用美国雅培公司试剂和美国AXSYM全自动酶免发光分析系统。抗-HBe采用竞争法,以样本荧光速率值与临界荧光速率值之比(S/N)≤1.0判阳性。
1.3 方法 (1)初筛:一步法,严格按说明书操作,每加5份血清加入酶标抗体。分别检测HBeAg、抗-HBe.(2)复核:溶血标本重抽血,脂法患者禁脂3天后抽血;血块收缩不良,分离不完全标本,经3000r/min10~15min的离心。HBeAg用一步法和微粒子酶免分析。抗-HBe用改进二步法和微粒子酶免分析法,改进再二步法为先加入50μl血清37℃水浴30min,洗涤3次,加酶标抗体37℃水浴30min,再严格按说明书操作。
2 结果
初筛63份HBeAg和抗-HBe双阳血清。经复核:18份HBeAg阴性,抗-HBe仍阳性,45份抗-HBe阴性,HBeAg仍阳性。18份HBeAg阴性标本为溶血和分离不完全标本,初筛与复检吸光度(A值)比较明显下降,差异有非常显著性(P<0.001),见表1.45份抗-HBe复核阴性标本中,一步法与改进2步法吸光度(A值)比较,吸光度值上升,二者差异有非常显著性(P<0.001),见表2. 表1 HBeAg初筛与复检吸光度值比较(略) 表2 3种方法测定血清抗-HBe水平比较(略)
3 讨论
有学者提出HBeAg和抗-HBe双阳是HBeAg向抗HBe转化的过渡阶段 [1] .本次试验与以上理论不完全相符,双阳性结果是假阳性所致,可能的原因为:溶血标本释放大量过氧化物酶活性的血红蛋白,产生干扰。血块收缩不良,分离不彻底,血清中混有过氧化物酶成分,对HBeAg产生正干扰 [2] .脂浊致抗-HBe干扰主要考虑乳糜微粒引起,它造成血清黏度增大的运动速度减慢或产生屏蔽效应,抗原抗体结合几率下降,最终显色降低,产生假阳性。一步法对抗-HBe易产生前带现象,若血清中有大量HBeAg,使固相HBeAb-HBeAg-HBeAb-HRP生成减少,显色下降产生假阳性。二步法的第一步洗涤洗掉多余HBeAg,可消除有效的假阳性。一步法若加入血清放置时间过长,再加酶标抗体也会产生抗-HBe假阳性 [3] .二步法试验有3份抗-HBe仍为阳性,限于条件有限未能研究,可能是抗-HBe和抗-HBc互相干扰所致,或者是AFP、RF、补体、自身抗体、抗大肠杆菌抗体等的干扰[4] .
综上所述,HBeAg和抗-HBe双阳多为操作不规范和一步法影响因素造成。工作中可用一步法复核HBeAg,改进2步法复核抗-HBe,抗-HBe仍阳性采用美国雅培公司MEIA法复核可有效消除假阳性的产生。
参考文献
1 朱忠勇。实用医学检验学。北京:人民军医出版社,1992,900-901.
2 赵友云,刘光中,马煜南。酶免疫检测HBeAg假阳性原因分析。临床检验杂志,2000,18:263.
3 腾龙,陈钢,洪加林。酶免疫竞争一步法检测乙型肝炎病毒抗-HBe影响因素探讨。中华医学检验杂志,2003,26:111.
4 黄云英,刘瑜。建立乙肝免疫五项无效试剂。临床二级评价方案的探讨。现代医学检验杂志,2002,17:30-32.