摘要:目的 建立牡丹皮的HPLC 指纹图谱,为科学评价与有效控制牡丹皮质量提供新方法。方法 采用HPLC 法测定了10 个不同产地牡丹皮样品,色谱条件为Shim - pack C18 (150mm ×4.6mm ,5μm) ,流动相为乙腈- 水梯度洗脱,流速0.8ml/min,检测波长230nm ,柱温为25℃。结果 本研究建立的分析方法有较好的重复性,不同产地的牡丹皮药材色谱峰相对保留时间一致。结论 为牡丹皮药材的质量控制提供了科学的依据 医学教 育网收集整理 。
关键词:牡丹皮 高效液相色谱 指纹图谱
牡丹皮为毛莨科植物牡丹( Paeonia suffruticosa Andr.) 的根皮,主产于四川、安徽、山东等地,以安徽的凤丹皮质量最佳。其性微寒,味苦、辛,归心、肝、肾经。历史记载其功效为清热凉血、活血化瘀。研究发现牡丹皮还具有抗炎、镇静、降压、抗血栓、抗动脉粥样硬化和抗心率失常等作用。牡丹皮主要含有丹皮酚、芍药苷、羟基芍药苷、苯甲酰基芍药苷以及苯甲酰羟基芍药苷等成分[1 ,2 ] 。目前,多用丹皮酚的含量控制牡丹皮的质量,但这样不能反映其他成分的情况,难以真正控制其质量。鉴于中药具有复杂的化学成分,而其活性成分常常不甚明确,国内外学者认识到色谱指纹图谱方法是评价植物药质量的有效方法之一。本实验采用HPLC 方法建立牡丹皮的指纹图谱,为全面控制牡丹皮的质量提供了新的方法。 [医学教育网整理发布]
1 仪器与试药
HP1100 高效液相色谱仪。乙腈、甲醇为色谱纯;水为蒸馏水。丹皮酚对照品购于中国药品生物制品检定所。牡丹皮药材样品见表1 。
2 方法和结果
2.1 对照品溶液的制备 精密称取丹皮酚对照品适量,用甲醇配制成0.08mg/ml的溶液。
2,2 供试品溶液的制备 精密称取牡丹皮粉末25mg ,加适量甲醇,超声提取30min ,定容至10ml ,过0.45μm 微孔滤膜,续滤液作为供试品溶液,备用。
2.3 色谱条件 色谱柱: Shim - pack C18 (150mm ×4.6mm5μm) (日本岛津公司) ;流动相:CH3CN 与H2O ,梯度洗脱,梯度洗脱时间见表2 ;检测波长:230nm;流速:0.8ml/mim;进样量:10μl :柱温:25℃。 医学教 育网收集整理
2.4 精密度试验 取3 号样品,连续进样5 次,记录图谱。结果表明, 各色谱峰的相对保留时间基本一致( RSD 为0.16 %)
2.5 重现性试验 取8 号样品5 份,按供试品溶液制备方法操作,记录图谱。结果表明,各色谱峰的相对保留时间基本一致(RSD 为0.14 %)
2.6 稳定性试验 取5 号样品,分别在0 、2 、4 、8 、16h 测定,记录图谱。结果表明,各色谱峰的相对保留时间基本一致( RSD 为0.27 %)
2.7 牡丹皮的指纹图谱 测定了10 批样品,对其图谱分析,找出10 个共有峰。其中10 号峰为牡丹皮的主要成分丹皮酚,将其作为内参比峰,求出样品中共有峰的相对保留时间。共有峰的相对保留时间见表3 医学教 育网收集整理
3 讨论
3.1 根据文献[3～6 ]报道对丹皮酚和芍药苷含量测定的色谱条件,对流动相组成及洗脱方式分别进行了考察优化。乙腈- 水体系可以使大多数色谱峰峰形较好;等度洗脱时分离效果较差,梯度洗脱60min 内可使大部分的色谱峰得到基线分离。
3.2 实验还对检测波长进行了选择,分别在230nm ,254nm ,274nm 处检测,结果表明,在274nm ,254nm 处各色谱峰之间分离较好,但峰数少;在230nm 处,各方面条件都较好,故选230nm 检测。
3.3 实验测定了10 个不同产地牡丹皮样品,共获得10 个共有的色谱峰,其典型的色谱图(样品3) 见图1 。不同产地的样品各成分的含量虽然有一定的差异,但是各色谱峰的相对保留时间基本一致,符合指纹图谱的要求[ 7 ] 。本实验初步建立了牡丹皮的指纹图谱,还有待于进一步的研究;还应结合丹皮酚的含量测定对牡丹皮进行全面的质量控制。
参考文献
[1 ]肖培根1 新编中药志,第三卷: 北京: 化学工业出版社1601～6061
[2 ] 李方军1 牡丹皮化学成分及药理作用研究进展.安徽医药,2004 ,8 (1) :9～101
[ 3 ]中国药典-2000 年版(一部) . 北京:化学工业出版社.
[ 4 ]郭宝林,巴桑德吉,肖培根,等.中药牡丹皮原植物及药材的质量研究.中国中药杂志,2002 ,27 (9) :654～657.
[ 5 ]张克荣,毕开顺. 赤芍HPLC 指纹图谱的研究.中草药,2003 ,34(11) :1048～10511
[6 ]马翠英,戴宝成,林瑞超.黄芩中4 种黄酮的HPLC 定量分析及其黄酮类成分指纹图谱研究.药物分析杂志,2003 ,23 (2) :83～861
[ 7 ]国家药品监督管理局.中药注射剂指纹图谱研究的技术要求(暂行) .中成药,2000 ,22 (10) :671～6751
作者:姜潇,张君仁
摘自:齐鲁药事
。
