脑心通胶囊对中风病急性期和恢复期的各种症状均有较好的改善作用,为探讨其作用机理,我们以体外培养的大鼠胎脑神经细胞为研究对象,观察脑心通胶囊对正常血清培养的脑神经细胞及去除血清培养的脑神经细胞的影响,旨在观察脑心通胶囊对神经细胞凋亡的保护作用。
实验通过无菌解剖出胎鼠后,取脑皮质,置CO2培养箱培养。细胞活力采用台盼蓝排斥法检测,凋亡细胞采用荧光显微镜观察,计数。LDH(乳酸脱氢酶)释放采用培养液中LDH活性来测定,细胞损伤以培养细胞释放的LDH与总LDH活力的百分比表示 资料来源 :医 学 教 育网 。DNA的断裂用琼脂糖凝胶电泳分析法。
一、脑心通胶囊对神经细胞LDH释放的影响 医学 教育网搜集整理
神经细胞去血清后释放的LDH增多,与正常对照组比较有显著性差异,提示细胞损伤程度增大,脑心通胶囊与去血清对照组比较LDH释放有明显降低,统计学处理p<0.01,有显著性差异,见表1。
表1 脑心通胶囊对神经细胞LDH释放的影响(-X±s)
组别 n LDH释放(%)
对照组1(正常神经细胞) 6 6.2±2.1
对照组2(去血清神经细胞) 6 28.4±6.1*
脑心通组(去血清神经细胞) 6 15.7±5.2△ 资料来源 :医 学 教 育网
注: *p<0.01(与对照组1比较),△p<0.01(与对照组2比较)
二、脑心通胶囊对神经细胞活力的影响 资料来源 :医 学 教 育网
用台盼蓝排斥法检测,在光学显微镜下可观察到活细胞无色,死细胞着色。用凋亡细胞双染色法检测时,在荧光显微镜下可观察到正常细胞发蓝色荧光,染色质均匀分布;凋亡细胞也发蓝色荧光,但染色质凝集、核皱缩、碎裂,细胞皱缩出芽、凋亡小体产生、坏死细胞发红色荧光。分别在光学显微镜和荧光显微镜下观察、计数,发现去血清后坏死细胞和凋亡细胞都显著增加(p<0.01),加入脑心通胶囊组的坏死和凋亡细胞数都显著减少,统计学处理p<0.01,有显著性差异,见表2。
表2 脑心通胶囊对神经细胞活力的影响(-X±s)
组别 n 坏死和凋亡细胞(%)
对照组1(正常神经细胞) 6 4.1±1.2
对照组2(去血清神经细胞) 6 89.0±9.2*
脑心通组(去血清神经细胞) 6 34.8±8.4△
注: *p<0.01(与对照组1比较),△p<0.01(与对照组2比较)
三、脑心通胶囊对神经细胞DNA的影响
正常细胞DNA在琼脂糖凝胶电泳上显示为分子量很大的一条带。去血清后神经细胞DNA降解,电泳显示清晰的DNA降解后的断片带,提示DNA断裂,细胞发生凋亡。电泳图谱显示脑心通胶囊可以抑制或部分抑制DNA的断裂,防止细胞凋亡。
许多实验研究表明,运用活血化瘀、益气养阴、补血通络之品确有保护神经细胞和抑制神经细胞凋亡的作用。本文以中枢神经系统脑皮质神经细胞为研究对象,观察了脑心通胶囊对凋亡的抑制作用。结果表明,脑心通胶囊能够增强神经细胞活力,减少LDH释放,减轻细胞核形态的改变及DNA的断裂,表明脑心通胶囊对神经细胞凋亡有抑制作用。通过以上实验证明这类方药的作用机制与细胞凋亡之间存在着规律性或必然性联系,细胞凋亡很可能是该方药产生疗效的分子机制之一,进而设想细胞凋亡可能是中医证候本质的分子学基础。
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