原理及方法:目前多数临床资料认为,乙型肝炎患者拉米夫定治疗过程中HBV出现YMDD变异是HBV耐药的转折点,因此YMDD变异检测已渐趋普遍。主要的检测方法有:
①PCR扩增法:PCR扩增-限制性酶切片断多态性分析(PCR-RFLP)是目前国内实验室最常用的YMDD变异、BCP区变异位点的检测方法。实时荧光PCR扩增是近期国内应用较多的HBV耐药检测方法。
②基因芯片分析:包括流体芯片技术、探针杂交技术,主要通过逆向斑点杂交技术实现对变异位点的检测。
③焦磷酸测序法:对YMDD突变质粒及血清标本的重复性及可靠性检测显示,质粒标准品的突变检出率及重复率为100%,而血清标本为98.8%。
④基因克隆与测序:采用特异性引物对YMDD所在目的片断进行克隆后测序,通过与标准株的比较识别变异位点。这是所有检测方法中最为客观的检测方法,但操作复杂、成本高、耗时长是该方法的主要缺陷。